破伤风患者的实验室检查一般无特异性发现，当有肺部继发感染时，白细胞计数可明显增高，痰培养可发现相应的病原菌，伤口分泌物常常分离到需氧性化脓性细菌，约30%患者的伤口分泌物经厌氧培养可分离出破伤风梭菌，由于破伤风的临床表现较为特异，尤其症状典型时诊断不难，故作临床诊断时不要求常规作厌氧培养和细菌学证据。
破伤风需与下列疾病相鉴别：
1.狂犬病：有犬、猫咬伤史，以吞咽肌痉挛为主。病人闻水声或看见水，即出现咽肌痉挛，饮水无法下咽，大量流涎。牙关紧闭者很少见。
2.脑膜炎：有颈项强直、“角弓反张”等症状，但无阵发性肌痉挛。有发热、头痛、喷射样呕吐、神志改变、白细胞计数增高，脑脊液检查压力增高。
3.士的宁中毒：症状与破伤风相似，但抽搐间歇期肌松弛。
4.其它：如颞颌关节炎、癔病、子、低钙性抽搐等。
