1.暗视野显微镜检查在皮损处，用玻片刮取组织渗出液或淋巴结穿刺液，见有活动的梅毒螺旋体。2.免疫荧光染色在荧光显微镜下可见绿色的梅毒螺旋体。3.梅毒血清试验根据所用抗原不同，梅毒血清试验分为以下两大类：（1）非梅毒螺旋体抗原血清试验 用心磷脂作抗原，测定血清中抗心磷脂抗体，亦称反应素。快速血浆反应素试验是性病研究实验室实验（VDRL）抗原的改良试验，敏感性及特异性与VDRL相似，优点是肉眼即可读出结果。不加热血清反应素玻片试验也是VDRL抗原的改良，敏感性及特异性与VDRL相似。（2）梅毒螺旋体抗原血清试验 荧光梅毒螺旋抗体吸收试验：此法是较敏感和较特异的螺旋体试验。梅毒螺旋体血凝试验：敏感性和特异性均高，操作简便，但对一期梅毒不如荧光密螺旋体抗体吸附实验（FTA-ABS）试验敏感。
根据病史和临床表现,结合血清学检查可作出诊断。需与慢性小腿溃疡、皮肤结核等相鉴别。
