可分为TP直接检查、梅毒血清试验及脑脊液检查。
１.TP直接检查
可取病灶组织渗出物、淋巴结穿刺液或组织研磨液，用暗视野显微镜、镀银染色、吉姆萨染色或直接免疫荧光检查等方法。
２.梅毒血清试验
梅毒血清试验是梅毒主要的检查方法和确诊的主要依据，分为非特异性试验（包括RPR、TRUST和VDRL试验）和特异性试验（包括TPHA、TPPA和FTA-ABS）。非特异性试验为采用免疫学方法检测血清中的心磷脂抗体，作为梅毒的诊断筛选试验。本试验敏感性高而特异性低。阳性结果时，可初步诊断。定量试验是观察疗效、判断复发及再感染的手段。一期梅毒硬下疳出现后的2～3周内可出现假阴性。特异性试验即梅毒螺旋体抗原血清试验，阳性结果可明确诊断。但常呈持久阳性，不可用于观察、判断疗效。
３.脑脊液检查
主要用于神经梅毒的诊断，包括白细胞计数、蛋白定量、VDRL、PCR和胶体金试验。一般不作为一期梅毒的诊断方法。
１.生殖器疱疹：初起为微凸红斑，1，2日后形成簇集性小水疱疹，自觉痒痛，不硬，1-2周后可消退，但易复发，组织培养为单纯疱疹病毒，Tzank涂片检查阳性，PCR检测疱疹病毒DNA为阳性。
２.下疳样脓皮症：病原菌为金黄葡萄球菌或链球菌，皮损形态与硬下疳类似，但无典型软骨样硬度，周围无暗红色浸润，无不洁性交史，梅毒螺旋体检查阴性，附近淋巴结可肿大，但皮损愈后即消退。
３.软下疳：亦为性病之一，有性接触史，由杜克雷(Duery)嗜血杆菌引起，潜伏期短(3-4日)，发病急，炎症显著，疼痛，性质柔软，皮损常多发，表面有脓性分泌物，可检见杜克雷嗜血杆菌，梅毒血清试验阴性。
４.结核性溃疡：亦多见于阴茎，龟头，皮损亦为单发孤立浅在性园形溃疡，表面常有结痂，自觉症状轻微，可检见结核杆菌，常伴有内脏结核。
５.白塞氏(Behcet)病：可在外阴部发生溃疡，女性亦可见于阴道，子宫颈，溃疡较深，有轻微瘙痒，损害无硬下疳特征，常继发口腔溃疡，眼损害(虹膜睫状体炎，前房积脓等)，小腿结节性红斑及游走性关节炎等，梅毒血清反应阴性。
６.急性女阴溃疡：下疳型者类似硬下疳，但不硬，炎症显著，疼痛，分泌物中可查见粗大杆菌。
７.固定性药疹：可见于阴茎包皮内叶，冠状沟等处，为鲜红色红斑，可形成浅在性糜烂，自觉痒，不痛，无硬下疳特征，有服药史，梅毒血清反应阴性。
